| | 3M大腸桿菌/大腸菌群快速檢驗測試片操作以及判讀 |
| 一、測試大腸桿菌/大腸菌群 操作方法 | |
| 1、未開封時，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期內用完，高溫度時，凝固水可以排除，包裝物最好于室溫啟開。 | 2、已開封的，將封口以膠帶封緊。 |
| 3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和溫度<50％，不要冷藏已開啟的包裝袋，并于一個月內使用完。 | 4、制備1：10和更大稀釋的食物樣品稀釋液，稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內，如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內. |
| 5、加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的蛋白膠水(ISO方法6887) 、緩沖蛋白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水. 但不可用含有枸櫞酸鹽、bisulfite or thiosulfate的緩沖液. 因為它能抑止菌生長。 | 6、攪拌或均質樣品 酸性樣品的稀釋液用INNaoH調PH6.5－7.5，對堿性樣品的稀釋液用IN HCL調PH6.5－7.5。 |
| 7、將測試片置于平坦表面處，揭開上層膜。 | 8、使用吸管將1ml樣液垂直滴加在測試片的中央處。 |
| 9、細心將上層膜緩慢蓋下，避免有氣光泡產生，切勿使上層膜直接落下。 | 10、使用壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央處。 |
| 11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上，切勿扭轉壓板。 | 12、拿起壓板，靜置至少1分鐘以使培養基凝固。 |
| 13、測試片的透明面朝上，可堆疊至20片，對有一定濕度養箱能保持最少份損失是需要的。 | 14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數，并可參考判讀卡計算菌落數。 |
| 15、可以分離菌落作進一步鑒定，即掀起上層膜，由培養膠上挑取單個菌落。 | |
| 二、測試大腸桿菌/大腸菌群 判讀方法 | |
| Petrifilm ColiformTM Coliform測試片含有VRB培養劑 (Violet Red Bile)，一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁(tetrazollium)指示劑，可增強菌落計數效果。絕大多數E .coli（約占97%）能產生-葡萄糖甘酸酶與培養基中的指示劑反應，產生藍色沉淀環繞在大腸桿菌菌落周圍，表面覆蓋的膠膜，可留住發酵乳糖的大腸菌群產生的氣體，約有95%的大腸桿菌產生，形成藍色或深藍上菌落并有氣泡相連接，氣泡大小約為1個菌落直徑。 AOAC和FDA細菌學分析手冊（RAM）規定大腸菌群為革蘭氏陰性桿菌，發酵乳糖產酸產氣。大腸菌群菌落在Petrifilm CC測試片上生長產酸，PH指示劑使培養基顏色變深，在紅色菌落周圍有氣泡者，為大腸菌群細菌。大腸桿菌鑒定，在不同國家可以有變更（見培養時間和溫度部分指示）。 |
| 該測試片不能單獨測定E.coli O157,像大多數其他E.conliform培養基一樣,它沒有專門指示是否有任何0157菌株的存在. AOAC確認的方法: E.coli=49(藍色菌落帶有氣泡) Total coliform=87(紅色和藍色菌落帶有氣泡) | No growth=0 注意圖2到8 培養基顏色的變化,隨著E.coliform菌數增多,培養基顏色變成暗紅色或藍紫色,背景的泡(沫)為培養基現象,不是大腸桿菌或大腸菌群生長結果,見方框1. |
| E.coli connt=13 Total coliform count=28 Petrifilm Ec測試片菌落數適宜計數范圍是15-150,不要計算圓形培養基外的菌落,因為泡棉上已不含選擇性培養基.見圓圈! | E.coli count=3 任何藍色菌落(藍色到紅藍色)表明有E.coli存在,正面照明增強形成藍色沉淀菌落的測定,圓圈1示為背面光照的紅藍菌落,圓圈2示為同一菌落的正面光照藍色沉淀更明顯些. |
| E.coli count=17 Estimated total coliform count =150 測試片面積約為20cm2,當菌落數超過150 個,為了估計菌落數可選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm2 )計算平均菌落數,再乘以20方可得到整個測試片上的菌落數 | Actual count～106 Petrifilm EC測試片菌落無法計數時至少有下列現象之一: 1.很多小菌落 2.有許多氣泡 3.培養基的顏色變深,由紅色到藍紫色 |
| Actual count～108 高數量的大腸桿菌可以引起長生區變成藍紫色. | Presumptive E.couli count～8 Estimated total coliform count～108 當大腸菌群數>108 時,一些大腸桿菌菌株可能產生少量氣體和不明確的藍色菌落.所有不帶氣泡的藍色菌落和(或)藍色環帶,推定為大腸桿菌需計數,如有必要需挑取不帶氣泡的藍色菌落,進行確認試驗. |
| Actual count～108 當有大量的非大腸菌群細菌如假單胞菌屬細菌存在時,petrifilm EC 測試片培養基顏色呈黃色. | Total coliform count=3 食物顆粒為不規則形狀,且不帶氣泡. |
| Total coliform count=78 氣泡可有不同形狀,氣泡可使菌落撐散,使菌落輪廓似氣泡,見圓圈1和2. 人為氣泡可能是不當的操作所致,或是來自樣品內的氣體,它們成不規則形狀,且不與菌落相連接.見圓圈3 | 例如1-10示為不同形狀氣泡與菌落連接情況，所有菌落應記數。 |
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