DNA Fragment Purification Kit

MagExtractor^®

-PCR & Gel Clean up-

使用說明書

(Code No. : NPK – 601)

TOYOBO CO. , LTD.Biochemical Operation Department

OSAKAJAPAN

—目錄—

[1] 前言 ........................................................................................... 1

[2] 純化流程...................................................................................... 2

[3] 試劑盒中所包含的物品................................................................. 3

[4] 試劑盒以外所需要的其他物品...................................................... 3

[5] 回收DNA溶液............................................................................. 4

[6] 回收瓊脂糖凝膠........................................................................... 5

[7] 疑難解答...................................................................................... 8

注意：

本試劑盒中所包含的都是研究用試劑。請不要用于診斷，臨床等場合。在使用本試劑盒的時候，請嚴格遵守實驗室的基本注意事項，注意安全。由于本試劑盒內(nèi)含有對人體有害的試劑，所以請務必嚴格遵守各試劑的相關使用說明書，按要求使用保護罩等防護措施。

[1] 前言

MagExtractor - PCR & Gel Clean up-利用在Chaotropic（鹽）試劑存在的情況下，核酸能吸附在硅膠上的特性^1），用于手動對DNA片段進行純化。本試劑盒采用磁硅膠粒子，若使用磁性臺架，則能最大限度地減少復雜的離心操作，能夠快速地的純化DNA片段。

1)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76(2) 615-619(1979)

特征

試劑盒的用途

回收的DNA的用途

[2] 純化流程

下圖顯示為使用MagExtractor-PCR &

Gel Clean up-時的純化流程。

[3] 試劑盒中所包含的物品

本試劑盒中包含以下試劑。（200次份）

*吸附液，洗凈液在低溫情況下會析出結晶。請一邊用手捂暖，一邊

將其倒轉(zhuǎn)混合讓結晶溶解后使用。另外，吸附液及洗凈液內(nèi)含有蛋白

變性劑。在使用時務必注意，萬一沾到身體，請立刻用清水沖洗。

[4] 試劑盒以外所需要的其他物品

1．試劑

·滅菌蒸餾水<溶出液>

·75％乙醇<洗凈用>

2．器具，器材

·1.5ml小型試管用磁性臺架

·簡易臺式離心機

·漩渦混合器

·Heat Block 55℃（用于在需要去除混于回收液中的乙醇的場合）

*可使用本公司的磁性臺架Magical Trapper（Code No.：MGS-101）等產(chǎn)品。

[5] 回收DNA溶液 1．前言 ·本操作程序用于從DNA溶液（約100μl）中回收DNA片段。 ·能夠回收的DNA大小約為100bp～50kb。另外，40bp以下的核酸 幾乎能夠被加以除去。 · 磁珠的最大吸附量為每30μl磁珠大約吸附5μg。使用時請以2.5μg左右為參考量。 ·能夠從PCR反應液，限制酶反應溶液，堿性磷酸酶反應液等各種反 應液中回收DNA。 ·回收后的DNA，能夠用于限制酶處理、測序、連接、標記、雜交等多種反應

2．操作程序

DNA溶液（100μl）^1）

↓← 400μl吸附液

↓← 30μl磁珠²⁾

↓不時用漩渦混合器攪拌，并放置約1～2min（室溫）

B/F（固/液）分離^3）

↓←（600μl洗凈液）^4）

↓漩渦混合器攪拌10sec，

B/F分離。^3）

↓←1ml75％乙醇^4）

↓漩渦混合器攪拌10sec，

B/F分離。^3）

瞬時高速離心，徹底去除上清部分。

（打開小型試管的蓋子，55℃下放置5min，干燥）^4）

↓←25～100μl蒸餾水

↓漩渦混合器攪拌10sec，

（在無法充分將粒子分離的情況下，請用pipetting來分離粒子。）

↓放置2min

B/F分離，回收上清液。^5）

1）請盡量不要含礦物油。

2）使用磁珠前，請徹底懸濁混合后再使用。

3）將試管放置在磁性臺架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持續(xù)去除

上清部分。通過乙醇清洗時，可以通過將上清液倒入其他容器進行去除。

B/F分離時推薦使用對應于微型試管的磁性臺架，但也可用簡易臺式離心機，用大約6,000r.p.m程度，5sec.的離心進行分離。g會根據(jù)離心機的轉(zhuǎn)子口徑而發(fā)生變化，所以請調(diào)整旋轉(zhuǎn)數(shù)，使得能更有效地集合粒子，并保證凝結不至于過度。

4）請參照3.的表。

5）回收液中少量混入的磁珠并不會有礙下一次的反應，但在測定吸附度

等場合時，請通過瞬時高速離心除去磁珠。

3．關于工序的省略，純化規(guī)模

·洗凈工序，加熱工序可以省略（請參照下表）

·根據(jù)DNA溶液的量，可以按比例減少本試劑盒中附帶的吸附液、洗凈

液和磁珠的使用量。此時，無需減少75％乙醇溶液的使用量。

[6] 回收瓊脂糖凝膠

1．前言

·本操作程序適用于從TAE或者TBE瓊脂糖凝膠（約0.3g）中回收

DNA片段。本操作程序是以瓊脂糖濃度2％以下的凝膠為對象。

要使用2％以上的凝膠時，推薦所使用凝膠的量少于0.3g。另外，本

操作程序不需要使用特殊的低融點瓊脂糖凝膠。

·能夠回收的DNA大小約為100bp～50kbp。

·回收后的DNA主要用于連接反應、標記、測序等反應。

2．操作程序

瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色。

↓

在UV照射下（Long wave），為了使得目標條帶盡可能地變小，使

用切割刀或手術刀等進行切開。

↓

把切開的瓊脂糖切細，放到1.5ml小型試管中。（此時稱得重量，如

果大于0.3g則分幾次進行。）^1）

↓←400μl吸附液

在凝膠完全溶解之前，將其放置在室溫中，并不時進行攪拌。^2）

↓←30μl磁珠^3）

↓經(jīng)常用漩渦混合器攪拌，并放置2min（室溫），

B/F分離。^4）

↓←600μl洗凈液

↓漩渦混合器攪拌10sec，

B/F分離。^4）

↓←1ml75％乙醇溶液^5）

↓漩渦混合器攪拌10sec，

B/F分離。^4）

瞬時高速離心，徹底去除上清部分。

（打開微型試管的蓋子，55℃下放置5min，干燥）^5）

↓←25～100μl蒸餾水

↓漩渦混合器攪拌10sec

（在無法充分分開粒子的情況下，請用pipetting來分散粒子。）

↓放置2min

B/F分離，回收上清液^6）

1） 將瓊脂糖凝膠制成切片，以利于溶解。

2） 如果想要快速溶解瓊脂糖凝膠或凝膠難以溶解時，請加溫至55℃

5min。

3） 使用磁珠前，請徹底混合后再使用。

4） 將試管放置在磁性臺架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持續(xù)去

除上清部分。要洗凈乙醇，也可以通過將上清液倒入其他容器來去除。

B/F分離時推薦使用對應于微型試管的磁性臺架，但也可使用簡易臺式離心機，用大約6,000r.p.m程度，5sec.的離心進行分離。g會根據(jù)離心機的轉(zhuǎn)子口徑而發(fā)生變化，故請調(diào)整旋轉(zhuǎn)數(shù)，使得更有效地集合粒子，并保證凝結不至于過度。

5） 請參照3.的表。

6） 回收液中混入少量磁珠并不會有礙下一次的反應，但在測定吸附

度等場合時，請通過瞬時高速離心除去磁珠。

3．關于工序的省略，純化規(guī)模

·洗凈工序，加熱工序可以省略（請參照下表）

*從瓊脂糖凝膠中回收核酸時，必須用洗凈液清洗。

·根據(jù)DNA溶液的量，可以按比例減少本試劑盒中附帶的吸附液、洗凈

液和磁珠的使用量。此時，無需減少75％乙醇溶液的使用量。

[7] 疑難解答

1．回收量低

2．回收的核酸的吸光度不準確

3．回收后的核酸不能良好地進行反應

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