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食物過敏原的檢測方法

時間:2018-11-27 16:12:41來源:food欄目:檢驗技術 閱讀:

一、雙盲食物激發(fā)試驗:

雙盲食物激發(fā)試驗為診斷食物過敏的金標準,主要用于以下情況:

(1)幾種食物同時被懷疑為過敏原且特異性IgE(sIgE)陽性,為減少患者禁食種類時可使用;

(2)高度懷疑某一過敏物,但無sIgE抗體的證據(jù),為進一步確定進食該食物的安全性時使用;

(3)非IgE介導型食物過敏者多用該方法。患者應先進行排除飲食,然后施以食物刺激,在操作過程中為控制偏倚,可不讓患者知道進食食物的種類或使用安慰劑,但對反應較嚴重的IgE陽性的過敏原。不宜做該試驗。由于該試驗有一定危險性,且近年來有證據(jù)表明定量IrE檢 測可預測DBPCFC的試驗結果,結合臨床病史多數(shù)食物過敏可得到確診,故真正需進行DBPCFC的患者并不多。

二、皮膚針刺試驗(SPT)

SPT為臨床常用的檢測過敏原特異性IrE的體內(nèi)試驗。具體方法為用稀釋抗原液點刺皮膚,同時進行陰、陽性對照,15min后觀察檢測點是否出現(xiàn)風團或潮紅反應,如風團直徑超過陰性對照3mm則為陽性,表明存在與過敏原IgE結合的肥大細胞。SPT最顯著的優(yōu)點是價格便宜,快速,而且可讓有疑心的患者看到結果;但許多因素如季節(jié),測試時間,待測區(qū)域,藥物等都會影響其結果,且所用的蔬菜、水果等過敏原提取物缺乏穩(wěn)定的蛋白,故該法的重現(xiàn)性較差。同時,不同地區(qū)及醫(yī)院所檢測的過敏原種類、濃度、判別標準及質(zhì)控措施有很大差別,這使醫(yī)院間共用結果受到限制。

三、體外IgE檢測

與體內(nèi)試驗相比,體外檢測具有效能參數(shù)可靠,不受藥物影響,無全身反應危險等優(yōu)點,在下列情況下首選:(1)對過敏原極度敏感;(2)皮膚異常;(3)患者服用干擾皮膚反應的藥物;(4)患者不合作或拒絕皮膚檢測;(5)患者處于嚴重過敏反應后由于巨細胞介質(zhì)耗盡所致的不應期。近年來,體外sIgE檢測技術有了很大的發(fā)展。

1.放射過敏原吸附試驗(RAST):RAST為最早使用的過敏原檢測方法。其主要原理是將過敏原結合到固定相,加入待測血清及參考對照,血清內(nèi)存在的過敏原-slgE將吸附在固定相上,通過用放射性同位素標記的抗IrE二抗來檢測血清中的sIgE。由于該法費用昂貴,花費時間長,放射性同位素易過期且污染環(huán)境,不同來源試劑盒的參比血清不同而不易相互比較,待檢血清含有相同特異性IgG時可干擾正常結果,故目前已逐漸被測定帽(CAP)過敏原檢測法所代替。

2.測定帽(CAP)過敏原檢測系統(tǒng)是目前國際上廣泛應用并公認較為可靠的過敏原定量體外檢測系統(tǒng),主要原理為酶聯(lián)免疫熒光測定法(FEIA)。CAP系統(tǒng)建立于新型固體相——裝在小膠囊中的親水性載體聚合物上,由一種經(jīng)溴化氰活化的纖維素衍生物合成,與過敏原有極高的結合能力。其過程為將50標準血清或患者血清加入到固有相,再將酶標抗IgE二抗加入到固有相中,最后測定熒光并與標準曲線比較。CAP過敏原檢測法測定范圍為0.35~100KU^/L(A:allergensIgE),變異系數(shù)(CV)<10%。通常以sIgE>0.35KU^/L為臨界點(即陽性反應),其陰性預報正確率達95%,敏感性也高達94%~100%,但其特異性較差,陽性預報正確率(PPV)則更低。若根據(jù)情況調(diào)整臨界點,則可提高其特異性和PPV,該系統(tǒng)可分析常見的6種食物過敏原:雞蛋、牛奶、花生、大豆、小麥和魚。

3.進口試劑和方法:這些方法的儀器試劑都很昂貴。

4.生物芯片:近年來,漸趨成熟的蛋白質(zhì)芯片技術因其高通量、微型化、平行性檢測等優(yōu)點,正越來越多的應用于藥物篩選、腫瘤標志篩查J、臨床檢測等領域,被看作是最有前景的診斷工具。盡管近年來蛋白芯片檢測過敏原有了很大發(fā)展,但有幾個問題仍需解決:(1)玻璃基質(zhì)本身的缺陷、芯片表面微塵的聚集及去濕化使蛋白芯片極易產(chǎn)生人為信號,而這些干擾信號是操作者不能簡單識別的,因此,必須建立嚴格的標準以評估結果;(2)蛋白芯片點樣不準確,批間差異較大,這還需通過點樣技術的提高來克服。

四、生物共振技術

目前,生物共振技術在食物過敏原檢測中的應用受到越來越廣泛的關注。過敏是一種生物物理信息現(xiàn)象,該現(xiàn)象在人體內(nèi)產(chǎn)生需要過敏印痕的出現(xiàn),這種過敏印痕來源于物質(zhì)與人體的多次接觸,然后逐漸產(chǎn)生基于物質(zhì)信息的生物物理印痕,一旦人體產(chǎn)生了這種印痕信息,它就可能被維持并處于休眠狀態(tài),當再次接觸過敏源時印痕被激活,并進而通過生物物理脈沖誘發(fā)常見的變態(tài)反應疾病。每種過敏印痕的信息是此種過敏原惟一的生物物理共振模式,使用共振技術可將致敏信號檢測出來。

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