下列步驟請在無菌環境下操作：
1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。
2、滴數滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔熱纖維紙和內管，以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。
4、( a ) 適用于細菌
用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養基，滴入內管內，并輕微震蕩（可用該吸管協助），直到均勻懸浮。
( b ) 適用于霉菌、酵母菌
用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無菌水，滴入內管內，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于指定的平板培養基上，做劃線分離培養或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養基內，并依指定的溫度培養之。
6、某些菌種經過冷凍干燥保存后，遲滯期 ( lag period ) 較長，必須等培養二倍時間后才能長出，且再經過一、二次繼代培養 (Subculture) 后才能正常生長。經過以上的努力后仍培養失敗，才視為不能活化。
7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時，請于收到菌種之一個月內，以問題菌株反應單傳真至本中心，即進行處理。
8．未開封之冷凍干燥管，請冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。

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